Nome del prodotto
HiPure Plasmid EF Mini Kit
Cat. N. e
specifiche
P115402,50 Prep/kit
Introduzione
Il
mini
kit HiPure Plasmid EF combina la potenza della
tecnologia HiPure con
l'innovativa tecnologia di rimozione delle endotossine di Magen per offrire DNA plasmidico di alta qualità con bassi livelli di endotossina per l'uso nella transfezione eucariotica e in esperimenti in vitro. Il
sistema HiPure Plasmid Endo-Free utilizza un tampone appositamente formulato che impedisce alle molecole di endotossina di legarsi alla superficie
della matrice HiPure. La contaminazione da endotossina riduce l'efficienza di trasfezione per linee cellulari sensibili all'endotossina. Per la terapia genica, la contaminazione da endotossine deve essere di grande preoccupazione poiché le endotossine possono causare febbre, sindrome da shock endotossico e interferire con la trasfezione in vitro nelle cellule immunitarie.
Composizione principale
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Codice prodotto
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P115402
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P115403
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Tempi di purificazione
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50
Prep
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250 Prep
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RNasi A.
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5 mg
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20 mg
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Buffer P1
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30
ml
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140
ml
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Buffer P2
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30 ml
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140 ml
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LEN3 buffer
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15 ml
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70 ml
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Buffer LN4
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50 ml
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250 ml
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Buffer LN5
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30 ml
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140 ml
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Buffer PW1
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30 ml
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140 ml
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Buffer
PW2
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12 ml
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50 ml
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Tampone di eluizione
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15 ml
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30 ml
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Mini colonne HiPure DNA III
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50
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250
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Provette di raccolta da 2 ml
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50
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250
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Condizioni di conservazione e
validità
I componenti HiPure Plasmid EF Mini Kit sono garantiti per almeno un anno se conservati a temperatura ambiente. Se si formano precipitati nei tamponi, riscaldare a 37ºC per dissolversi.
Dopo l'aggiunta di RNasi A e del reagente LyseBlue opzionale, il tampone P1 rimane stabile per 6 mesi se conservato a 2-8°C.
Preparazione prima dell'uso
Diluire il tampone
PW2
con etanolo al 100% e conservare a temperatura ambiente temperatura
Aggiungere il flaconcino di RNasi A al flacone di
Buffer P1
e memorizzazione a 2-8˚C.
Tampone di eluizione a caldo a 70°C se il DNA plasmidico è >10 kb
4.HiPure DNA Mini colonna III può legarsi fino a DNA 70µg
.
Guida alla risoluzione dei problemi
A:basse rese di DNA
1.
il tampone
PW2
non contiene etanolo
:
Prima
dell'uso, aggiungere etanolo al tampone PW2.
2.scarsa lisi cellulare
:
Le cellule potrebbero non essere state adeguatamente disperse prima dell'aggiunta
del tampone P2
. Agitare per risospendere completamente le cellule.
3.
perdita di capacità legante della matrice di colonna durante la conservazione:
Seguire il protocollo opzionale per l'equilibratura della colonna prima di trasferire il lisato eliminato nella colonna. Aggiungere 100µL
3M NaOH alla colonna prima di caricare il campione. Centrifugare a 13000
giri/min
per 30 secondi. Eliminare il filtrato.
B:il DNA plasmidico galleggia fuori dal pozzetto durante il caricamento del gel di agarosio
1.l'etanolo non è stato completamente rimosso dalla colonna dopo le fasi di lavaggio
, centrifugare
la colonna come indicato per essiccare la colonna prima dell'eluizione.
C:contaminazione del DNA ad alto peso molecolare del prodotto
Non agitare o miscelare in modo aggressivo dopo aver aggiunto
il tampone P2.
Le colture in eccesso contengono cellule lisate e DNA degradato. Non far crescere la cellula per più di 16 ore.
D:l'assorbanza del DNA purificato non riflette accuratamente la quantità di Il plasmide (rapporto A260/A280 è alto o basso)
Il DNA plasmidico è contaminato con RNA
:
Il trattamento con RNasi A è insufficiente confermare che la soluzione di RNasi A è stata aggiunta al
tampone P1
prima del primo utilizzo. La soluzione di RNasi A può degradarsi a causa di temperature elevate (>65 °C) o di una conservazione prolungata (> 6 mesi a temperatura ambiente).
2.
la lettura di fondo è elevata a causa del particolato fine della silice
:
Centrifugare il campione di DNA alla velocità massima per 1 minuto; utilizzare il surnatante per ripetere le letture dell'assorbanza.