Introduzione
Il mini kit HiPure Plasmid EF combina la potenza della tecnologia HiPure con l'innovativa tecnologia di rimozione delle endotossine di Magen per fornire DNA plasmidico di alta qualità con bassi livelli di endotossina per la trasfezione eucariotica e per esperimenti in vitro.
Il sistema plasmide HiPure privo di endo utilizza un tampone appositamente formulato che impedisce alle molecole di endotossina di legarsi alla superficie della matrice HiPure. La contaminazione da endotossina riduce l'efficienza di trasfezione per le cellule sensibili all'endotossina. Per la terapia genica, la contaminazione da endotossine deve essere di grande concertazione, poiché le endotossine possono causare febbre, sindrome da shock da endotossine e interferire con la trasfezione in vitro nelle cellule immunitarie.
Specifiche
Caratteristiche | Specifiche |
Funzioni principali | Isolamento di DNA plasmidico privo di endotossine fino a 70µg 10 da ml di batterio cultura |
Applicazioni | Trasfezione cellulare, iniezione animale, ecc. |
Metodo di purificazione | Colonna mini spin |
Tecnologia di purificazione | Tecnologia della silice |
Metodo di processo | Manuale (centrifugazione o vuoto) |
Tipo di campione | Plasmide convenzionale |
Quantità campione |
Plasmide ad alta copia: Terreno di coltura da 10 ml Plasmide a basso numero di copie: Terreno di coltura da 10 ml |
Resa | 10 70μg |
Volume di eluizione | ≥75μl |
Tempo per esecuzione | ≤ 40 minuti |
Volume di trasporto liquido per colonna | 800μl |
Resa legante della colonna | 70μg |
Principio
La procedura del plasmide HiPure si basa sulla lisi alcalina di cellule batteriche seguita dall'adsorbimento del DNA su silice in presenza di sale elevato. L'esclusiva membrana in silice utilizzata nel kit sostituisce completamente le impasti in vetro o silice per i minipreparazioni di DNA plasmidico. La procedura consiste in 3 fasi fondamentali: Preparazione e eliminazione di un lisato batterico mediante metodo alcalino, quindi trasferire il supernatante nella colonna per legare il DNA. Dopo il lavaggio di proteine e altre impurezze, l'acido nucleico è stato infine eluito con tampone a basso contenuto di sale (10 mm Tris, pH9,0, 0,5mm EDTA).
Vantaggi
Contenuto del kit
Contenuto | P115402 | P115403 |
Tempi di purificazione | 50 Prep | 250 Prep |
RNasi A. | 5 mg | 20 mg |
Buffer P1 | 30 ml | 140 ml |
Buffer P2 | 30 ml | 140 ml |
LEN3 buffer | 15 ml | 70 ml |
Buffer LN4 | 50 ml | 250 ml |
Buffer LN5 | 30 ml | 140 ml |
Buffer PW1 | 30 ml | 140 ml |
Buffer PW2 | 12 ml | 50 ml |
Tampone di eluizione | 15 ml | 30 ml |
Mini colonne HiPure DNA III | 50 | 250 |
Provette di raccolta da 2 ml | 50 | 250 |