Kit di sintesi cDNA a primo filamento Swescript Rt I. (Con gDNA Remover) 100 rxns

Model No.
G3331-100
Applicazione
Industria, Ricerca scientifica
Pacchetto di Trasporto
Carton
Specifiche
100RXNS
Marchio
Servicebio
Origine
China
Prezzo di riferimento
$ 108.90 - 126.00
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Descrizione del Prodotto


Introduzione al prodotto:
Questo prodotto utilizza la trascrittasi inversa mutante modificata per sintetizzare il primo filamento di cDNA con RNA totale o mRNA come stampo per una trascrizione inversa efficiente. Il kit contiene tutti i reagenti necessari per sintetizzare il primo filamento di cDNA con alta qualità e fornisce due tipi di primer di sintesi di cDNA a scelta: Il primer Random Hexamer e i prodotti di cDNA a singolo filamento sintetizzati dall'innesco di Oligo (DT)18 che possono essere utilizzati direttamente per successive reazioni PCR o qPCR. SWEScript RT i (trascrittasi inversa) è una trascrittasi inversa mutante basata sulla trascrittasi inversa M-MLV e ottenuta attraverso screening evolutivo in vitro. SWEScript RT i non ha attività RNasi H. La degradazione di RNA nello stampo di ibridazione di DNA/RNA durante la prima reazione di sintesi di cDNA di filamento è stata evitata, in modo da assicurare la quantità e la lunghezza della sintesi di cDNA di primo filamento.  Rispetto all'enzima di tipo selvatico, la stabilità termica e l'efficienza di sintesi di SweScript RT i sono significativamente migliorate, e il cDNA può essere sintetizzato efficientemente nell'intervallo di 42 55ºC, così come il cDNA fino a 10 KB.  
Il kit fornisce anche il reagente GDNA Remover, che può rimuovere rapidamente la contaminazione del DNA genomico residuo dai modelli di RNA prima delle fasi di trascrizione inversa, migliorando l'affidabilità dei risultati sperimentali e semplificando la progettazione di primer qPCR senza la necessità di progettazione di primer cross-eson.

Contenuto della confezione :
Cat. No Descrizione del prodotto Volume
G3331 Kit di sintesi del cDNA del primo filamento SweScript RT I. (Con gDNA Remover) 50 rxns/100 rxns


Componenti :
Numero componente Componente G3331 -50 G3331 -100
G3331 -1 Miscela enzimatica SweScript RT I. 50 ul 100 ul
G3331 -2 Tampone di reazione 5x 200 ul 400 ul
G3331 -3  Primer oligo (DT)18 (100 um ) 50 ul 100 ul
G3331 -4 Primer esamer casuale (100 um ) 50 ul 100 ul
G3331-5 Rimozione gDNA 50 ul 100 ul
G3331-6  10 x tampone di rimozione gDNA 50 ul 100 ul
G3331-7 Acqua senza nucleasi 1 ml 1 ml
Manuale 1 pz 1 pz
A : con inibitore della RNasi
b : con miscela dNTP & Mg² +

Condizioni di conservazione :
Trasporto in sacchi di ghiaccio umido; conservati a una  temperatura di -20ºC, validi per 12 mesi.

Utilizzo :
1. Rimozione del genoma
(1) lo stampo di RNA e l'acqua priva di nucleasi sono stati posti su ghiaccio per fondere per un uso successivo;
(2) reazione di rimozione del genoma (sistema di reazione raccomandato di 10 ul):
Componente Volume
10 x tampone di rimozione gDNA 1 ul
Rimozione gDNA 1 ul
RNA/mRNA totale 0.1 ng-5ug / 10 pg-0.5ug
Acqua senza nucleasi Aggiungere a 10 ul
(3) miscelare delicatamente e centrifugare;
(4) incubare a 37ºC per 2 minuti e poi mettere su ghiaccio per un uso successivo;
Sintesi del primo filamento di cDNA
(1) preparazione di un sistema di reazione di trascrizione inversa (si raccomanda un sistema di reazione di 20 ul);
Componente Volume
Nella fase precedente, il genoma ha rimosso il fluido di reazione 10 ul
5 x tampone di reazione 4 ul
 Primer oligo (DT)18 (100 um ) 1 ul
O primer esamer casuale (100 um ) o 1ul
O primer gene-specifico (2um ) o 1ul
Miscela enzimatica SweScript RT I. 1 ul
Acqua senza nucleasi Aggiungere a 20 ul
Nota: Per modelli con GC elevato o complessi, il modello RNA, i primer di trascrizione inversa e l'acqua priva di Nucrenasi possono essere miscelati in anticipo e quindi raffreddati su ghiaccio rapidamente dopo essere stati mantenuti a 65ºCfor 5 min. E quindi si aggiungono gli altri componenti.
( (2) miscelare e centrifugare delicatamente;
(3) impostazione del programma di trascrizione inversa:
Temperatura Ora
25ºCa 5 min
50ºCb 15-30 min
85ºC 5 s
A: Ad esempio, il primer esamero casuale viene selezionato e incubato a 25ºCfor 5 min, quindi viene eseguita la reazione successiva. Se sceglie di usare il primer Oligo (DT)18 o gene-specific, può reagire direttamente a 50ºC.
b: Per modelli con GC elevato o complessi, la temperatura di trascrizione inversa può essere aumentata a 55ºC C.

Note :
1. Durante il funzionamento, indossare guanti monouso per evitare la contaminazione da RNasi.   
2. I prodotti di trascrizione inversa possono essere conservati a -20ºC per un breve periodo di tempo. Se è necessario conservare a lungo termine, si consiglia di conservarli a -80ºC dopo l'imballaggio per evitare cicli ripetuti di congelamento-scongelamento.   
Se lo stampo è di origine eucariotica, si raccomanda di selezionare il primer Oligo (DT)18 e di accoppiarlo con la coda 3' Poly A di mRNA eucariotico per ottenere la massima resa di cDNA a lunghezza intera.   
Per la trascrizione inversa dell'RNA procariotico, si deve usare un primer esamero casuale o un primer gene-specifico.   
L'innesco esamero casuale ha un'ampia applicabilità ed è adatto per stampi di mRNA, rRNA, tRNA, RNA piccolo e lncRNA.   
Se la trascrizione inversa è seguita da un saggio qPCR, l'innesco di Oligo (DT)18 e l'innesco di esamero casuale possono essere miscelati per rendere uguale l'efficienza di sintesi di cDNA in tutte le regioni di mRNA, il che contribuisce a migliorare l'autenticità e la ripetibilità dei risultati quantitativi.   
Se i successivi inneschi di qPCR sono progettati attraverso esoni, la fase di rimozione del genoma può essere omessa.   
Swescript Rt I First Strand Cdna Synthesis Kit (With gDNA Remover) 100rxns Swescript Rt I First Strand Cdna Synthesis Kit (With gDNA Remover) 100rxns Swescript Rt I First Strand Cdna Synthesis Kit (With gDNA Remover) 100rxns Swescript Rt I First Strand Cdna Synthesis Kit (With gDNA Remover) 100rxns Swescript Rt I First Strand Cdna Synthesis Kit (With gDNA Remover) 100rxns
 

 

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