Swescript Rt II Primer capítulo de síntesis de Adnc Kit con el removedor de Gdna

No. de Modelo.
G3333-100
Denominación Hábito
Medicina Química
Aplicación
Industria, Investigación Científica
Propiedad
Reactivo bioquímico
Paquete de Transporte
Carton
Especificación
100RXNS
Marca Comercial
Servicebio
Origen
China
Precio de referencia
$ 99.00 - 112.50
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Descripción de Producto

Introducción al producto

Este producto utiliza la modificación de la mutante de la transcriptasa reversa para sintetizar el primer capítulo de cDNA de alta eficiencia en la transcripción inversa con el RNA total o mRNA como plantilla. El kit contiene todos los reactivos necesarios para sintetizar la alta calidad de primera línea de cDNA, y proporciona dos adnc. Los primers sintéticos están disponibles: Aleatorio Hexamer imprimación y oligo (dT)18 de imprimación. La síntesis de adnc trenzado único producto puede utilizarse directamente para las posteriores reacciones de PCR o qPCR. SweScript RT II (de la transcriptasa reversa) es un mutante de la transcriptasa inversa sobre la base de M-MLV la transcriptasa inversa y obtener a través de la evolución in vitro de cribado. SweScript RT II no tiene actividad RNASA H, y evita la plantilla de híbridos de ADN/ARN en el primer capítulo de la reacción de síntesis de adnc. Oriente el ARN es degradado para garantizar la cantidad y duración del primer capítulo de la síntesis de adnc. En comparación con la enzima de tipo salvaje y la primera generación SweScript RT I, la estabilidad térmica y la síntesis de adnc la eficiencia de la segunda generación SweScript RT II son mejorar aún más. De manera eficiente sintetizar adnc en el rango de -65ºC, y completar la transcripción inversa la reacción en el más rápido 5 minutos, que es especialmente adecuado para la transcripción reversa de ARN con estructura compleja.

Este kit también incluye extractor gDNA reactivo, que rápidamente pueden quitar los restos de ADN genómico de la contaminación en el ARN plantilla antes de la transcripción inversa paso, mejorar la fiabilidad de los resultados experimentales, y simplificar el diseño de cebadores qPCR sin la necesidad de diseñar cebadores a través de los exones.
Swescript Rt II First Strand Cdna Synthesis Kit with Gdna Remover

Almacenamiento y transporte

Bolsa de hielo (hielo) el transporte.

La tienda de -20°C, válido durante 12 meses.

Componentes :
Número de componentes El componente G3333-50 G3333-100
G3333-1 SweScript RT II enzima Mixa 50 μL. 100 μL.
G3333-2 5×Bufferb reacción 200 μL. 400 μL.
G3333-3 Oligo (dT) 18  primario (100 μM) 50 μL. 100 μL.
G3333-4 Azar Hexamer primario (100 μM) 50 μL. 100 μL.
G3333-5 Removedor de gDNA 50 μL. 100 μL.
G3333-6 El removedor de 10×gDNA Buffer 50 μL. 100 μL.
G3333-7 Agua Nuclease-Free 1 mL 1 mL
Manual 1 1
A: contiene inhibidor de la rnasa.
B:contiene la mezcla de dNTP y Mg 2+ .

Los pasos
1. La extracción de genomas
(1) Coloque la plantilla de ARN y Nuclease-Free agua en hielo para derretir para su uso.
(2) preparar un sistema de reacción de eliminación del genoma (10 μL recomendado) :
El componente El volumen
El removedor de 10×gDNA Buffer 1 μL.
Removedor de gDNA 1 μL.
De RNA total/arnm 0,1 ng-5 μg/10 pg-0.5 μg

Agua Nuclease-Free
  		Añadir a 10 μL.
(3) Mezclar suavemente y centrifugar.
(4) incubar a 37°C durante 2 minutos y el lugar en el hielo para su posterior uso.
2. El primer capítulo de la síntesis de adnc
(1) la transcripción reversa de preparación del sistema de reacción (20 μl de reacción sistema es recomendado):
El componente El volumen

La extracción del genoma de la solución de reacción 		10 μL.
5×tampón de reacción 4 μL.
Oligo (dT) 18  primario (100 μM) 1 μL.
O al azar Hexamer primario (100 μM) O 1 μL.
O gen primario específico (2 μM) O 1 μL.
SweScript RT II Mezcla de enzimas 1 μL.
Nucleasa agua libre Agregar a 20 μL.
Nota: Para la alta GC o complejos, plantillas de plantillas de ARN, la transcripción inversa los cebadores, nucleasa libres de agua puede ser pre-mezclado y se incubaron a 65°C durante 5 minutos, y luego se enfría rápidamente sobre el hielo. A continuación, agregar otra reacción de los componentes.
(2) Mezclar suavemente y centrifugar.
(3) la transcripción inversa el ajuste de programa:
La temperatura El tiempo
25ºCa 5 min
55ºCb 5-15 min
85º C. 5 seg.
R: Si usted decide usar Azar Hexamer imprimación, incubar a 25°C durante 5 minutos y luego realizar las posteriores reacciones; si usted decide usar oligo (dT)18 aparejo o imprimación genéticos específicos, puede realizar directamente la reacción a los 55°C;
B: Para la alta GC o complejos de plantillas, la transcripción inversa la temperatura puede aumentarse a 65°C.
Precauciones
1. Por favor, use guantes desechables durante la operación para evitar la contaminación arnasa.
2. La transcripción inversa producto puede almacenarse a -20°C durante un corto período de tiempo. Si el almacenamiento a largo plazo es necesario, se recomienda almacenarla a -80°C después aliquoting para evitar la repetición de la congelación y descongelación.
3. Si la plantilla es de origen eucariota, se recomienda elegir oligo (dT)18 Cartilla para emparejarse con el 3'Poli una cola de arnm de eucariotas para obtener el máximo rendimiento de adnc de longitud completa.
4. Para la transcripción reversa de ARN procariotas, por favor, use Random Hexamer aparejo o imprimación genéticos específicos.
5. Imprimación Hexamer aleatorio tiene una amplia aplicabilidad, adecuado para el arnm, Arnr, Arnt, pequeños ARN y LncRNA plantillas.
6. Si la transcripción inversa es seguido por un experimento qPCR, oligo (dT)18 y al azar Hexamer Cebador manual se pueden combinar para hacer la síntesis de adnc la eficiencia de cada región del arnm de la misma, que contribuye a mejorar la autenticidad y la repetibilidad de los resultados cuantitativos.
7. Si la posterior qPCR Cebadores diseñados a través de los exones, el genoma extracción paso puede omitirse.

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Reactivo Químico

PNEUTEC.IT, 2023