Mode d'utilisation :
1. Extraction de l'ADN de l'échantillon
Il est recommandé d'utiliser la co-extraction des acides nucléiques du virus Kit de Shijiazhuang Shengbo
Biotechnology Co., Ltd. Pour l'extraction d'échantillons d'ADN. Veuillez utiliser le réactif
instructions.
2. Ajout d'échantillon
Après la décongélation naturelle de la solution de réaction qPCR, en prendre 17μ
l dans le tube PCR, ajouter 3
μ
l d'acide nucléique extrait à l'étape 1, couvrir le couvercle du tube, mélanger et centrifuger.
3. Amplification PCR
3.1 placer le tube de réaction dans le réservoir de réaction PCR quantitative fluorescent ;
3.2 définissez le nom de l'échantillon et les informations sur le canal.
4. Analyse des résultats
4.1 Réglage de la condition d'analyse des résultats
Définir la ligne de base et le seuil : en général, analyser les résultats directement en fonction de la machine.
4.2 jugement de résultat
Voir les résultats du
sous-type H5 dans le canal FAM
,
le
sous-type H5 dans le canal HEX (ou
VIC, JOE)
et
le sous-type H9 dans le canal Cy5.
Positif : valeur CT du canal de détection ≤ 37.0, et la courbe présente une croissance exponentielle évidente
courbe;
Suspect : si la valeur CT du canal de détection est comprise entre 37.0 et 40
(
37.0< valeur CT
≤
40
)
,
il est recommandé de répéter la détection. Si le résultat du test est également le même et que la courbe a
une courbe de croissance évidente, elle est déterminée comme positive, sinon elle est négative;
Négatif : il n'y a pas de valeur CT.
5. Limites des méthodes de détection
Étape
Nombre de cycles
Température
heure
Collecte du signal
1
1 cycle
90
ºC
30 secondes
Non
2
1 cycle
60
ºC
5 min
Non
3
95
ºC
1 min
Non
4
40 cycles
95
ºC
10 secondes
Non
5
60
ºC
31 secondes
Les
résultats des tests YesSample sont liés au prélèvement, au traitement, au transport et au stockage des échantillons
qualité;
Si la contamination croisée n'est pas bien contrôlée pendant l'extraction de l'échantillon, des résultats faux positifs
s'affiche ;
La fuite de produits de contrôle positif et d'amplification entraînera des résultats faux positifs;
Les différentes méthodes d'extraction ont une efficacité d'extraction différente, ce qui peut conduire à des fausses
résultats négatifs;
Le transport des réactifs, un stockage incorrect ou une préparation incorrecte des réactifs entraînent une diminution
de l'efficacité de détection des réactifs, ce qui entraîne une détection quantitative erronée ou inexacte
résultats;
Les résultats du test sont à titre de référence uniquement. Si vous devez être diagnostiqué, veuillez combiner avec
symptômes cliniques et autres méthodes d'essai.
6
. Norme de contrôle de la qualité
Matériel de contrôle de qualité négatif : pas de courbe d'amplification ou d'affichage de la valeur CT évident ;
Matériel de contrôle de qualité positif : la courbe d'amplification a une amplification d'index évidente
Forme en S et valeur CT ≤ 32 ;
Les conditions ci-dessus doivent être remplies en même temps, sinon l'expérience le sera
considéré comme non valide.
7.
Indice de performance du produit
Le taux de coïncidence des références positives et négatives: 5 références positives étaient de 100%;
10 les références négatives étaient de 100 %.
La limite de détection minimale était de 5 × 102
copies/ml.
Précision : coefficient de variation (CV) de la valeur CT de détection de précision dans et
entre les lots est ≤ 3 %.