Metodo di utilizzo:
1. Estrazione del DNA del campione
Si raccomanda di utilizzare la co-estrazione di acido nucleico virale Kit Shijiazhuang Shengbo
Biotecnologia Co., Ltd. Per l'estrazione del DNA campione. Operare in base al reagente
istruzioni.
2. Aggiunta di un campione
Dopo aver scongelamento naturale della soluzione di reazione qPCR, prelevare 17μ
l di essa nella provetta PCR, aggiungere 3
μ
1 di acido nucleico estratto nella fase 1, coprire il coperchio della provetta, miscelare e centrifugare.
3. Amplificazione PCR
3.1 porre il tubo di reazione nel serbatoio di reazione PCR quantitativa fluorescente;
3.2 impostare il nome del campione e le informazioni sul canale.
4. Analisi dei risultati
4.1 impostazione delle condizioni di analisi dei risultati
Impostazione della linea di base e della soglia: In genere, analizzare i risultati direttamente in base alla macchina.
4.2 giudizio dei risultati
Vedere i risultati del
sottotipo H5 nel canale FAM
,
il
sottotipo H5 nel canale ESADECIMALE (o.
VIC, JOE)
e
il sottotipo H9 nel canale Cy5.
Positivo: Valore CT del canale di rilevamento ≤ 37.0, e la curva ha una crescita esponenziale evidente
curva;
Sospetto: Se il valore CT del canale di rilevamento è compreso tra 37.0 e 40
(
37.0< valore CT
≤
40
)
,
si consiglia di ripetere il rilevamento. Se il risultato del test è uguale anche , e la curva ha
una curva di crescita ovvia, viene determinata come positiva, altrimenti è negativa;
Negativo: Non è presente alcun valore CT.
5. Limitazioni dei metodi di rilevamento
Fase
Numero di cicli
Temperatura
ora
Raccolta del segnale
1
1 ciclo
90
ºC
30 sec
No
2
1 ciclo
60
ºC
5 min
No
3
95
ºC
1 min
No
4
40 cicli
95
ºC
10 sec
No
5
60
ºC
31 sec
YesSample
i risultati dei test sono correlati alla raccolta, all'elaborazione, al trasporto e alla conservazione dei campioni
qualità;
Se la contaminazione incrociata non è ben controllata durante l'estrazione del campione, i risultati sono falsi positivi
viene visualizzato;
La perdita di prodotti positivi di controllo e amplificazione porterà a risultati falsi positivi;
Diversi metodi di estrazione hanno differenti efficienza di estrazione, che porterà a falsi
risultati negativi;
Il trasporto dei reagenti, la conservazione errata o la preparazione errata dei reagenti determinano un declino
dell'efficienza di rilevamento dei reagenti, con conseguente falso negativo o rilevamento quantitativo impreciso
risultati;
I risultati delle analisi sono solo di riferimento. Se è necessario eseguire la diagnosi, combinarla con
sintomi clinici e altri metodi di prova.
6
. Standard di controllo qualità
Materiale di controllo qualità negativo: Nessuna curva di amplificazione o visualizzazione del valore CT evidente;
Materiale di controllo qualità positivo: La curva di amplificazione ha un'evidente amplificazione dell'indice
Forma S e valore CT ≤ 32;
Le condizioni di cui sopra dovrebbero essere soddisfatte allo stesso tempo, altrimenti l'esperimento sarà
considerato non valido.
7.
Indice delle prestazioni del prodotto
Il tasso di coincidenza dei riferimenti positivi e negativi: 5 riferimenti positivi sono stati del 100%;
10 i riferimenti negativi sono stati del 100%.
Il limite minimo di rilevamento era 5 × 102
copie/ml.
Precisione: Il coefficiente di variazione (CV) del valore CT della rilevazione di precisione all'interno di e.
tra i lotti è ≤ 3%.