مزيج الاستنساخ In-Fusion 2 مرات

نموذج رقم.
G3350-100T
استعمال
الكواشف المخبرية, الكواشف التحليلية, الكواشف التدريس
عادة تسمية
الكاشف خاص
تطبيق
صناعة, البحث العلمي
عقارات
الكاشف الكيميائي الحيوي
حزمة النقل
Carton
تخصيص
100T
العلامة التجارية
Servicebio
الأصل
China
السعر المرجعي
$ 82.80 - 99.00
اتصل بنا

وصف المنتجات

G3350-100T
مقدمة:
2×in-Fusion Cloning Mix يمكن بسرعة وصل واستنساخ أجزاء واحدة أو 2~3 متعددة في المتجه. وهو مناسب بشكل خاص لوصل جزء واحد، وسوف تقل كفاءة ربط أجزاء 2-3. استخدم أي طريقة لخطي المتجه، وتقديم التسلسل النهائي للمتجهات الذي يتم تحويل خطه إلى خط عند طرف 5 من مقدمة تضخيم الاتجاه للأمام/العكسي من جزء DNA الذي تم إدخاله في المتجه الخطي، بحيث تكون نهايتي 5 و3'نهايتي منتج تضخيم PCR على التوالي هناك تسلسل (15-25 BP) متوافق مع نهاية المتجه الخطي. في 2×in-Fusion Cloning Mix لاول مرة، خلط منتج PCR بنفس التسلسل عند كلا طرفي المتجه الخطي والمتجه الخطي في نسبة معينة، ثم احتضان على الجليد (أو في خليط من الثلج والماء) لمدة 5 دقائق، يمكنك تحويل الخلايا المختصة والاستنساخ الكامل الاتجاه.
يمكن أن يحقق هذا العرض الأول استنساخ سلس للحمض النووي بطريقة فعالة وسريعة. ويمكن استخدامها لبناء بلازميدات معاد التركيب أو بلازميدات معاد التركيب. لا يعتمد العرض الأول على نظام وصل الأحرف، مما يقلل إلى حد كبير من خلفية الربط الذاتي للمتجهات، وفي الوقت نفسه، لا يحتاج إلى مراعاة مواقع تقييد endonuclEase المضمنة في الملحق نفسه. بالنسبة إلى بناء البلازما ادة التكاثر أحادية المقطع (DNA)، فإن نسبة المستنسخات الموجبة التي يتم الحصول عليها باستخدام هذه المادة الأولية (premix) تصل إلى 99%. لا يعتمد استخدام جهاز العرض الأول هذا على معدات درجة الحرارة الثابتة، ويمكن إكمال جميع العمليات من إعداد عينات DNA إلى تحويل المنتجات المُعاد التركيب وطرقل هذه المنتجات في غضون بضع ساعات، مما يوفر الوقت بشكل كبير.

التخزين والنقل
النقل  مع ثلج رطب؛ التخزين في درجة حرارة -20 درجة مئوية، صالح لمدة 12 شهرًا.
 
المكون G3350-10T G3350-20T G3350-100T
خليط نسخ 2×داخل-Fusion 50 ميكرو لتر 100 ميكرو لتر 5×100 ميكرو لتر
pUC19 (متغذي، متجهات تحكم، 5 نانوغرام/ميكرو لتر) - 10 ميكرو لتر 10 ميكرو لتر
مدخل التحكم (10 نانوغرام/ميكرولتر) - 10 ميكرو لتر 10 ميكرو لتر
دليل المستخدم 1

نظام التفاعل (يوصى باستخدام نظام تفاعل 10 مايكرولتر)  
المكون مستوى الصوت
خليط نسخ 2×داخل-Fusion 5 ميكرو لتر
Vector (متجه × ميكرو لتر
مقطع DNA y ميكرو لتر
ماء خالٍ من النوكلياز أضف إلى 10 ميكرو لتر
ظروف التفاعل
حمام ماء ثلج (مزيج من الماء المثلج)، تفاعل لمدة 5 إلى 10 دقائق

تحويل منتج التفاعل
1) إزالة الخلايا المختصة (مثل هرنα، أو هـ. كلي، أو 10، إلخ) من البراد في درجة حرارة تبلغ -80 درجة مئوية ثم إذابة الجليد عنها.
2. أضف العينة التي تم التفاعل معها إلى الحالة المختصة، وحرّك الجزء السفلي من الأنبوبة برفق بأصابعك لمزج الأنبوبة، ثم امزجها في ثلج لمدة 30 دقيقة.
3. يوضع المنتج بعد ذلك في مغطس ماء بدرجة حرارة 42 درجة مئوية لتسخين الماء لمدة 90 ثانية. وبعد الانتهاء من ذلك، يتم وضعه بسرعة على الجليد ويغمر في الثلج لمدة دقيقتين إلى خمس دقائق.
4. خذ 900 مايكرولتر من الزيت العقيم أو رطل متوسط وأضيفه إلى أنبوب EP. بعد الخلط، ضع أنبوب EP على غربال وقم بحضانة على ٢٢٠ دورة في الدقيقة عند ٣٧ درجة مئوية لمدة ساعة واحدة لاستعادة البكتيريا (يمكن وضعه أيضًا في حضانة تبلغ ٣٧ درجة مئوية لثقافة المكان الثابت لمدة ١ ساعة)؛
5) وفقاً للمتطلبات التجريبية، ارسم أحجاماً مختلفة من الخلايا المؤهلة المحولة وأضفها إلى الوسط الصلب LB الذي يحتوي على المضادات الحيوية المقابلة، ثم قم بنشر الخلايا بالتساوي، وبعد امتصاص السائل بالكامل، ضع الطبق رأساً على عقب في حضانة تبلغ درجة حرارتها 37 درجة مئوية وزرعته بين عشية وضحاها.

تحديد كبونيس موجبة
يتم اختيار المستعمرات أحادية النسيلة التي يتم زراعتها على الصفيحة لتحديد PCR المستعمرة، أو بعد الثقافة، يتم استخراج البلازميد بواسطة الهضم أو تحديد PCR، أو يتم تسلسل البلازميد المستخرج مباشرةً وتحليلها لتحديد الهوية.

الاحتياطات
1) يجب تنقية المتجهات والشظية المستهدفة بالجل والصعق بالكهرباء لاكتشاف جودتها وتركيزها. عندما يكون التركيز منخفضا، ليس من الضروري إضافة الماء واستخدامه مباشرة للتكويز.
2. يجب أن تكون قيمة TM بين المناطق المتداخلة من أجزاء متعددة متناسقة وأن تكون >60 درجة مئوية
3. يوصى بأن تكون النسبة المولية للمتجهات المطلوب إدخالها 1:1~1:3؛ وعند توصيل جزأين أو ثلاثة، تكون النسبة المولية بين كل جزء 1:1، كما تقل كفاءة الربط بين جزأين أو ثلاثة أجزاء. يمكن زيادة نظام تفاعل الربط بنسب متساوية. .
4) عندما يكون الحجم الإجمالي للمتجهات والإدخال أكبر من 5 مايكرولتر، يمكن تكبير نظام التفاعل إلى 20 ميكرولتر.
5) يجب ألا يتجاوز حجم منتج وصل الأحرف 1/10 من حجم الخلية المختصة، وإلا سيتم تقليل فعالية التحويل بشكل كبير. يمكن زيادة حجم منتج وصل الأحرف والخلية المختصة بنفس النسبة (مثل 20 مايكرولتر من نظام وصل الأحرف لتحويل 200 ميكرولتر من الخلايا المختصة).
6. يوصى باستخدام مزيج الاستنساخ 2×2×2×2-Fusion عند استخدامه، ثم إعادته إلى -20 درجة مئوية بعد الاستخدام مباشرة. وبعد ذوبان الجليد، يمكن تقسيمه إلى حزم وتجميده لتقليل أوقات التجمد والذوبان المتكررة.
7) عند استخدام الصعق بالكهرباء للتحول، يجب تنقية ناتج التفاعل بطريقة العمود أو طريقة الهطول بالإيثانول.
2 Times in-Fusion Cloning Mix

2 Times in-Fusion Cloning Mix 2 Times in-Fusion Cloning Mix 2 Times in-Fusion Cloning Mix 2 Times in-Fusion Cloning Mix
 

 

الكاشف الكيميائي

PNEUTEC.IT, 2023