T4 وصل DNA 5U لكل طقم نسخ جزيئي UL 500u

نموذج رقم.
G3340-100
استعمال
الكواشف المخبرية, الكواشف التحليلية, الكواشف التدريس
عادة تسمية
الكاشف خاص
تطبيق
صناعة, البحث العلمي
عقارات
الكاشف الكيميائي الحيوي
حزمة النقل
Carton
تخصيص
500U
العلامة التجارية
Servicebio
الأصل
China
السعر المرجعي
$ 20.70 - 31.50
اتصل بنا

وصف المنتجات

مقدمة:
يمكن أن يحفز ربط الحمض النووي لوصل الحمض النووي (DNA) T4 ربط DNA أو RNA ثنائي الحبيبات أو غير ذي النهاية الطاقحة بين الطرف 5'-P ونهاية الهيدروكسيد الثلاثة بوصلات فوسفوديستر. وفي الوقت نفسه، يستطيع الإنزيم أيضاً إصلاح الشقوق المنفردة العَسِر في سلاسل الحمض النووي الريبي المزدوجة (DNA) وDNA/RNA الهجينة.
تعريف النشاط: يمكن لوحدة واحدة من الإنزيم تحفيز 1 nmol من 32 pyrohophosفات على درجة حرارة ATP من خلال تفاعل الإزاحة خلال 20 دقيقة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية (وحدة واحدة تساوي 200 وحدة ملحقة لزجة).

T4 مخزن   تخزين ليغاز DNA: 20 مم تريس-إتش سي (7.5 درجة حموضة)، 50 مم KCl، 1 مم دتي تايتت، 50% (v/v) من جليسرول.
مخزن لوصل DNA 5×T4: 250 مم ثلاثي هيدروكسيل (درجة حموضة تبلغ 7.6)، 50 مم MgCl2 ، 5 مم ATP، 5 مم ثلاثي نقل الحركة (DTT)، محسن.

التخزين والنقل
النقل  مع ثلج رطب؛ التخزين في درجة حرارة -20 درجة مئوية، صالح لمدة 12 شهرًا.
رقم المكون المكون G3340-50 G3340-100
G3340-1 وصل الحمض النووي لـ T4 250 U (50 مايكرولتر) 500 U (100 ميكرو لتر)
G3340-2 مخفف لوصل DNA 5×T4 1 مل 2×1 مل
دليل المستخدم 1
حالات تفاعل الربط

يستغرق تفاعل الربط عند 25 درجة مئوية للنهايات اللزجة من 5-30 دقيقة؛ ولا يتجاوز تفاعل الربط عند 25 درجة مئوية للنهايات غير الفظة ساعتين أو التفاعل عند 4 درجات مئوية طوال الليل.

تحويل منتجات الربط

1) أخرج الخلايا المختصة (مثل هـ. كلي د5α، هـ. كولي Top10، وما إلى ذلك) من الثلاجة التي تبلغ درجة الحرارة 80 درجة مئوية وضعها على الجليد لإذابة الجليد؛

2) أضف العينة التي تم التفاعل معها إلى الحالة المختصة، وحرّك الجزء السفلي من الأنبوبة برفق بأصابعك لمزج الأنبوبة، ثم امزجها في ثلج لمدة 30 دقيقة؛

3. ثم ضع المنتج في حوض ماء تبلغ حرارته 42 درجة مئوية لتسخين الصدمة لمدة 90 ثانية بعد الانتهاء، ضعه على الثلج بسرعة لمدة تتراوح بين 2 و5 دقائق في حوض ثلج؛

4. خذ 900 مايكرولتر من الزيت العقيم أو رطل متوسط وأضيفه إلى أنبوب EP. بعد الخلط، ضع أنبوب EP على غربال وقم بحضانة على ٢٢٠ دورة في الدقيقة عند ٣٧ درجة مئوية لمدة ساعة واحدة لإنعاش البكتيريا (يمكن وضعه أيضًا في حضانة تبلغ ٣٧ درجة مئوية. وضع الثقافة لمدة ساعة واحدة)؛

5) وفقاً للمتطلبات التجريبية، ارسم أحجاماً مختلفة من الخلايا المؤهلة المحولة وأضفها إلى الوسط الصلب LB الذي يحتوي على المضادات الحيوية المقابلة، ثم قم بنشر الخلايا بالتساوي، وبعد امتصاص السائل بالكامل، ضع الطبق رأساً على عقب في حضانة تبلغ درجة الحرارة 37 درجة مئوية وزرع طوال الليل.


تحديد كبونيس موجبة

يتم اختيار المستعمرات أحادية النسيلة التي يتم زراعتها على الصفيحة لتحديد PCR المستعمرة، أو بعد الثقافة، يتم استخراج البلازميد بواسطة الهضم أو تحديد PCR، أو يتم تسلسل البلازميد المستخرج مباشرةً وتحليلها لتحديد الهوية.

الاحتياطات

1. يوصى بتكوين نظام التفاعل على الثلج.

2) عندما يكون تركيز المتجه وجزء الهدف منخفضين، ليس من الضروري إضافة الماء واستخدامه مباشرة للتكوينه.

3. يوصى بأن تكون النسبة المولية من الحمض النووي المتتجه إلى جزء DNA الذي تم إدخاله 1:3~1:10.

4) كمية صغيرة من الهطول في المخزن المؤقت لوصل DNA 5×T4 طبيعي. يمكن إذابة هذا المزيج في درجة حرارة 37 درجة مئوية قبل التجربة، وسيتم استخدامه بعد الخلط بشكل كامل. ولا يؤثر على التجربة؛ ويوصى بإذابة القسامات وتجميدها للاستخدام.

5. يوصى باستخدام ليغاز الحمض النووي T4 عند استخدامه والعودة إلى -20 درجة مئوية بعد الاستخدام مباشرة.

6) عند استخدام الصعق بالكهرباء للتحول، يجب تنقية منتج الاربطة بطريقة العمود أو طريقة تهطال الإيثانول.

7) عند توصيل المتجه ذي النهاية غير حادة بجزء DNA، يجب أن يكون المتجه ثنائي الفوسفور (يوصى بـ G3400) لمنع الدوران الذاتي له.

8. يرجى ارتداء معطف المختبر والقفازات التي تستعمل لمرة واحدة أثناء التشغيل.
T4 DNA Ligase 5u Per UL 500u Molecular Cloning Kit T4 DNA Ligase 5u Per UL 500u Molecular Cloning Kit T4 DNA Ligase 5u Per UL 500u Molecular Cloning Kit T4 DNA Ligase 5u Per UL 500u Molecular Cloning Kit T4 DNA Ligase 5u Per UL 500u Molecular Cloning Kit T4 DNA Ligase 5u Per UL 500u Molecular Cloning Kit T4 DNA Ligase 5u Per UL 500u Molecular Cloning Kit T4 DNA Ligase 5u Per UL 500u Molecular Cloning Kit

 

الكاشف الكيميائي

PNEUTEC.IT, 2023