Kit de Elisa neomicina

        Kit de imunoensaio enzimático competitiva para Análise quantitativa de neomicina 1. Justificativa Neomicina resíduos na produção de produtos biológicos podem levar a reações anormais de seres humanos, de modo estrito tenham sido estabelecidos limites máximos de resíduos.  Este kit é um produto de teste rápido para a determinação de resíduos de tetraciclina que é sensível, precisa e economiza tempo. Ele pode reduzir consideravelmente o funcionamento erros na dosagem. 2. Princípio de teste Este kit de ELISA foi projetado para detectar a neomicina baseado no princípio do "indirecto" anticoncorrencial enzima imunoensaio. Os poços de microtitulação são revestidos com capturar BSA-linked antígeno. Neomicina na amostra concorre com antigen revestido em microplaca de anticorpo. Após a adição da vacina conjugada enzima, substrato cromogénico é usado e o sinal é medido pelo espectrofotómetro. A absorção é inversamente proporcional à concentração de neomicina na amostra. 3. Os pedidos Este kit pode ser usado na  análise quantitativa e qualitativa de neomicina  resíduo em amostras biológicas. 4. Reações cruzadas Neomicina..........................….… 100% A estreptomicina ....................…………<1% Canamicina...............…..........…<1% Apramicina..............................  <1% Gentamicina..................................................  <1% Tobramicina ....................….........….<1% 5. Materiais Necessários 5.1 Equipamentos: Placa de microtitulação espectrofotómetro (450nm/630nm) Tubo de centrífuga wapolystirene: 2ml, 50ml Micropipetas: 20ml-200ml, 100ml-1000ml 250ml-multipipette 5.2 reagentes: Água desionizada 6. Componentes do Kit Placa de microtitulação com 96 poços revestidas com   antígeno de acoplamento Soluções padrão de neomicina×6 garrafas: 1ml/frasco 0ng/ml, 0.5Ng/ml,1.5Ng/ml,4.5Ng/ml, 13,5ng/ml, 40,5ng/ml    Solução padrão aditiva: 1ml, 1 μg/ml  O conjugado enzimático  (7ml)…..........… ..... tampa vermelha  Solução de anticorpos (7ml)............…tampa verde Uma solução de substrato (7ml) ............…tampa branca Solução de substrato B (7ml)............….… tampa vermelha Solução de Paragem (7ml)..................tampa amarela 20×solução de lavagem concentrada(40ml)  .....................…..Tampa transparente 2×diluente de amostra(50ml)   ............................ Tampa azul 7. Preparação de reagentes: Solução 1: diluente de amostra Diluir a amostra de 2×diluente com água deionizada em relação ao volume de 1:1, que será utilizado para a diluição da amostra. Esta solução pode ser armazenado a 4ºC durante 1 mês. Solução 2: solução de lavagem Diluir a 20×concentrado solução de lavagem com água deionizada em relação ao volume de 1:19, que será usado para lavar as placas. Esta solução pode ser armazenado a 4ºC durante 1 mês. 8. Preparação da amostra 8.1 Aviso e precauções para os usuários antes da operação: A. Use as dicas pontuais no processo de experimento e alterar as dicas para absorver o reagente diferente. B. Certifique-se de que todos os instrumentos experimentais são limpos , caso contrário irão afectar o resultado do ensaio. 8.2 Preparação da amostra: ---- Diluir a amostra de ensaio com o diluente de amostra preparada para obter uma concentração final de 0,5-40,5 ng/ml (Neomicina). ----Tomar 50 ml da solução preparada para o ensaio. 9. Processo de ensaio 9.1 Aviso antes do ensaio: 9.1.1 Verifique se todos os reagentes e micropoços são todos em temperatura ambiente (20-25ºC). 9.1.2 Devolver todos os reagentes de repouso para 2-8ºC imediatamente depois de utilizado. 9.1.3 Lavar o micropoços corretamente é um passo importante no processo de ensaio; é o factor vital para a reprodutibilidade da análise de ELISA. 9.1.4 Evitar a luz e a cobrir os micropoços durante a incubação. 9.2 As etapas de ensaio 9.2.1 Tomar todos os reagentes para fora em temperatura ambiente (20-25ºC) por mais de 30min, homogeneizar antes de usar. 9.2.2 Obter o micropoços necessários e devolva o resto no saco zip-lock em 2-8ºC imediatamente. 9.2.3 Solução de lavagem deve ser levada à temperatura ambiente (20-25ºC)  antes de usar. 9.2.4 Número: Número de cada posição microwell e todas as normas e as amostras devem ser executados em duplicado. Registre as normas e as posições de amostras. 9.2.5 Adicionar solução padrão/amostra conjugada enzima e a presença de anticorpos: adicionar 50 µl da solução padrão ou amostra preparada para poços correspondente. Adicionar 50 µl da solução de conjugado enzimático,50µl de solução de anticorpos para cada bem, Misturar agitando suavemente a placa manualmente e incubar durante 40min a 25ºC com tampa. 9.2.6 Lavar: Remova a tampa com cuidado e despeje o líquido de poços e enxagúe o micropoços com 250 µl de solução diluída de solução de lavagem(2) no intervalo de 10s por 4 a 5 vezes. Absorver a água residual com papel absorvente (resto bolhas de ar podem ser eliminados com a ponta não utilizados). 9.2.7 Coloração: adicionar 50 µl da solução A e 50µl de solução B para cada bem. Misturar agitando suavemente a placa manualmente e incubar durante 15 min a 25ºC com tampa (ver 12.8)   9.2.8 Medir: adicionar 50 µl da solução de paragem para cada bem. Misturar agitando suavemente a placa manualmente e medir a absorvância a 450 nm relativamente a um branco (ar é sugerido com a medida de comprimento de onda duplo de 450/630nm. Leia o resultado dentro de 5 min após a adição da solução de paragem. ) (Também podemos medir pelos olhos sem parar a solução em curto do leitor ELISA). 10. Resultados (1) Percentagem da absorvância Os valores médios da absorvância valores obtidos a partir de normas e a colheita de amostras seja dividido pelo valor de absorção do primeiro standard (norma zero ) e multiplicado por 100%.    = B --absorvância de normas ou de amostras B0 --absorvância da norma zero (0ng/ml) (2) Curva Padrão ---Para desenhar uma curva padrão: o valor absobance das normas como eixo y, semilogarithmic da concentração das normas (ng/ml) no eixo x. ---A neomicina concentração de cada amostra  (ng/ml), que pode ser lida na curva de calibração é multiplicado pela taxa de diluição correspondente de cada amostra seguido, e a concentração real da amostra. 11. Sensibilidade, exactidão e precisão A faixa linear: 0,5-40.5ng/ml Precisão: 100±30% Precisão:  CV do kit de ELISA todos menos de 10%. 12. Aviso 12.1 Os valores médios da absorvância valores obtidos para os padrões e as amostras será reduzida se os reagentes e amostras não tenham sido regulada a temperatura ambiente (20-25ºC). 12.2 não permitem micropoços estar seca entre as etapas para evitar a repetitividade vencida e operar o próximo passo imediatamente após bater o micropoços titular. 12.3 misturar o homogeneizado e eluir a placa adequadamente. 12.4 Evitar a solução de parar de tocar em pele para o 2M H2SO4. 12.5 Não use os kits desatualizado. Não trocar os reagentes de lotes diferentes, ou então ela cairá a sensibilidade. 12.6 constituição de armazenamento: Mantenha os kits ELISA em 2-8ºC sem congelados. Evitar a exposição solar directa durante todas as incubações. Cobrindo as placas de microtitulação é recomendado. 12.7 Os reagentes vá ruim: Solução de substrato deve ser abandonada se sua mudou de cor. Os reagentes podem ser vire ruim se o valor de absorvência (450/630nm) do padrão de zero for  inferior a 0,5  (A450nm<0,5). 12.8 A reação de coloração necessidade 20-30min após a adição da solução A e solução B; mas você pode prolongar o período de incubação varia de 35min e 40min se a cor for demasiado clara a determinar. Pelo contrário, encurtar o tempo de incubação adequadamente. 12.9 A melhor temperatura de reação é de 25ºC, com temperatura muito alta ou muito baixa tanto o levará para as alterações de sensibilidade e os valores de absorvência. 13. Condições de armazenamento e ao período de armazenamento      Condições de armazenamento: 2-8ºC. Período de armazenamento de dados: 12 meses.