Descrição de Produto

 
Competitivo enzima imunoensaio Kit para 
Análise quantitativa de estreptomicina 

1. Justificativa 
A estreptomicina é um aminoglicosídeo antibiótico, que é amplamente aplicado em animais de tratamento da doença. Para que tenha a neurotoxicidade e toxicidade renal, seus resíduos em alimentos de origem animal alimentos são nocivos para o homem; é rigorosamente controlado em uso na UE, os EUA e a China. Actualmente, ELISA é a abordagem comum na supervisão e controlo de estreptomicina drug 
Este kit é um novo produto de detecção residual baseada na tecnologia de ELISA, que custa apenas 1,5 em cada operação e pode reduzir consideravelmente os erros de funcionamento e intensidade de trabalho. 
2. Princípio de teste 
Este kit é baseado em acções indirectas-ELISA competitivo. Os poços de microtitulação são revestidos com antígeno de acoplamento. A estreptomicina resíduo em amostra concorre com o antígeno revestidos na placa de microtitulação para o anticorpo. Após a adição da enzima , conjugadas com substrato chromegenic é usado para mostrar a cor. Absorvência da amostra é negativamente relacionado à estreptomicina resíduo em ti, depois de comparar com a curva padrão, multiplicado pelo factor de diluição, estreptomicina quantidade de resíduos na amostra pode ser calculado. 
3. Os pedidos 
Este kit pode ser usado na análise quantitativa e qualitativa de estreptomicina resíduo em mel, geleia real... 
4. Reações cruzadas 
A estreptomicina..........................100,0% 
Sulfato de estreptomicina..................…67,0% 
Diidrostreptomicina.....................106% 
Gentamicina...............… .............…<1% 
Canamicina...........................…<1% 
Neomicina...........................…<1% 
Amicacina...........................…. <1% 
Spectionomycin ......................... <1% 
Apramicina...........................…... <1% 
5. Materiais Necessários 
5.1 Equipamentos 
----Placa de microtitulação espectrofotómetro (450nm/630nm) 
----Evaporador rotativo ou gás nitrogênio sistema de secagem 
----Homogeneizador 
----Shaker 
----Vórtex 
----Centrifugar 
----Balança analítica (A indutância: 0,01g) 
----Uma pipeta graduada: 10ml 
----Borracha lâmpada de pipetas 
----Balão volumétrico: 100ml. 1L 
----Proveta de vidro: 10ml 
----Poliestireno tubo de centrifugação: 2ml, 50ml 
----Micropipetas: 20 μl-200μl, 100ΜL-1000μl 
250ΜL-multipipette 
5.2 reagentes: 
----Água desionizada 
----Hidróxido de sódio NaOH.ar) 
----Acetocaoustin (AR) 
6. Componentes do Kit 
Placa de microtitulação com 96 poços revestidas com antigen 
Soluções padrão (6 garrafas×1ml/garrafa) 
0ppb,0,05ppb,0,15ppb,0,45 ppb,1,35ppb,4,05 ppb 
Enriquecidas solução padrão: (1ml/garrafa) 1ppm 
Concentrados conjugada enzima 1ml...….Tampa vermelha 
A diluição da enzima 10ml…… ..... tampa verde 
Solução de substrato um 7ml..........…tampa branca 
Solução de substrato B 7ml............tampa vermelha 
Solução de paragem 7ml..................…tampa amarela 
20×concentrado solução de lavagem 40ml 
 .........................Tampa transparente 
2×concentrados de solução de extracção 50ml 
 ............................…Tampa azul 
7. Preparação de reagentes: 
Solução 1: 1,5% acetocaustin solution 
 Adicionar 1,5 g acetocoustin para 100 ml de água desionizada ,misturar completamente . 
Solução 2: 0.1Mol/L de solução de NaOH 
 Peso de NaOH 0,4 g para 100 ml de água desionizada e misturar completamente . 
Solução 3: solução de extracção 
Diluir a 2×concentrados de solução de extracção com água deionizada em relação volume de 1:1, que será utilizado para lavar as placas. Esta solução pode ser armazenado a 4ºC durante 1 mês. 
Solução 4: solução de lavagem 
Diluir a 20×concentrado solução de lavagem com água deionizada em relação volume de 1:19, que será usado para lavar as placas. Esta solução pode ser armazenado a 4ºC durante 1 mês. 
8. Preparação da amostra 
8.1 Aviso e precauções antes da operação: 
(A) use um sugestões no processo de experimento e alterar as dicas para absorver o reagente diferente. 
(B) Se certificar de que todos os instrumentos experimentais estão limpos; caso contrário irá afectar o resultado do ensaio. 
(C) Manter as amostras tratadas em congelar. 
8.2 Mel 
----Pesar 1,0±0,05g de amostra de mel em 50ml de poliestireno do tubo de centrífuga, juntar em seguida 5 ml de água deionizada,(agitar durante 5 min até dissolução da amostra. 
--- E centrifugar a temperatura ambiente (20-25ºC) para 10min, pelo menos 3000g; 
----Tomar 200ml da camada sobrenadante e misture com 600 ml de solução de extracção (solução 3), misturar completamente. 
----Tomar 50 ml da solução preparada para o ensaio. 
8.3 geleia real 
----Pesar 1,0±0,05g de geleia real da amostra para um 50ml poliestireno do tubo de centrífuga, juntar em seguida 3 ml de 1,5% solução acetocaustin(consulte a solução 1), Vortex 5 min, misturar completamente. 
---- Centrifugar durante 5 min, pelo menos 3000g. 
----Tomar 100ml da camada sobrenadante e misture com 110m l 0.1Mol/L NaOH(consulte a solução 2), ajustar o PH para a gama de 6-8,adicionar 790m l de solução de extracção (consulte a solução 3),vortex 1 min, misturar completamente. 
----Tomar 50 ml da solução preparada para o ensaio. 
9. Processo de ensaio 
9.1 Aviso antes do ensaio: 
9.1.1 Verifique se todos os reagentes e micropoços são todos em temperatura ambiente (20-25ºC). 
9.1.2 Devolver todos os reagentes de repouso para 2-8ºC imediatamente depois de utilizado. 
9.1.3 Lavar o micropoços corretamente é um passo importante no processo de ensaio; é o factor vital para a reprodutibilidade da análise de ELISA. 
9.1.4 Evitar a luz e a cobrir os micropoços durante a incubação. 
9.2 Doseamento etapas: 
9.2.1 Tomar todos os reagentes para fora em temperatura ambiente (20-25ºC) por mais de 30min, agitar antes de usar. 
9.2.2 Obter o micropoços necessários e devolva o resto no zip-lock bag em 2-8ºC imediatamente. 
9.2.3 A solução de lavagem deve ser aquecido antes de utilizar; 
9.2.4 Número: Número de cada posição microwell e todas as normas e as amostras devem ser executados em duplicado. Registre as normas e as posições de amostras. 
9.2.5 Adicionar solução padrão/amostra: adicionar 50 µl da solução padrão ou amostra preparada para poços correspondente. 
9.2.6 Diluir o concentrado conjugada enzima: Misture o concentrado conjugado enzimático com diluição da enzima ,relação volume de1:10, misturar completamente, (esta mistura não pode ser conservada, utilize imediatamente)..2.7 Adicionar conjugada enzima : Diluição Adicionar 50 μl conjugada enzima solução de diluição (ver 9.2.6) Para cada bem, agitar a placa manualmente para misturar e incubar durante 30min a 25ºC com tampa. 
9.2.8 Lavar: Remova a tampa com cuidado e despeje o líquido de poços e enxagúe o micropoços com 250µl diluído a solução de lavagem (solução4) no intervalo de 10s por 4 a 5 vezes. Absorver a água residual com papel absorvente (resto bolhas de ar podem ser eliminados com a ponta não utilizados). 
9.2.9 Coloração: adicionar 50 µl de solução A e 50µl de solução B para cada bem. Misturar cuidadosamente, sacudindo a placa manualmente e incubar durante 15 min a 25ºC com tampa (ver 12.8) 
9.2.10 Medir: adicionar 50 µl da solução de paragem para cada bem. Misturar cuidadosamente, sacudindo a placa manualmente e medir a absorvância a 450 nm (recomenda medir com o duplo-onda de 450/630nm. Leia o resultado dentro de 5 min após a adição da solução de paragem.). 
10. Resultados 
10.1 absorvância percentuais 
Os valores médios da absorvância valores obtidos para os padrões e as amostras são divididos pelo valor de absorção do primeiro standard (norma zero) e multiplicado por 100%. O padrão de zero fica assim igual a 100% e os valores de absorvância são expressos em percentagens. 
 
B --absorvância (padrão ou amostra) 
B0 --absorvância da norma zero 
10.2 curva padrão 
----Para desenhar uma curva padrão: ter valor de absorção das normas como eixo y, semi logaritmo da concentração das normas de estreptomicina (ppb) como eixo x. 
----A estreptomicina concentra 
9 mento de cada amostra (ppb), que pode ser lida na curva de calibração é multiplicado pelo factor de diluição de cada amostra seguido, e a concentração real da amostra. 
Por favor note: 
Software Especial foi desenvolvido para todas as análises de dados, que podem ser fornecidas a pedido. 
11. Sensibilidade, exactidão e precisão 
A sensibilidade do teste: 0,05ppb 
Factor de diluição: Mel.....20 
 Geleia real…..30 

Limite de detecção: 

Mel........…..1ppb 
Geleia real.......................… ..... 1.5PPB 
Precisão: 
Mel / geleia real............…..........90±15% 
Precisão: 
Coeficiente de variação do kit de ELISA é inferior a 10%. 
12. Aviso 
12.1 Os valores médios da absorvância valores obtidos para os padrões e as amostras será reduzida se os reagentes e amostras não tenham sido regulada a temperatura ambiente (20-25ºC). 
12.2 não permitem micropoços secar entre as etapas para evitar tentativas de reprodutibilidade e operar o próximo passo imediatamente após bater o micropoços titular. 
12.3. Agitar cada reagente com cuidado antes de usar. 
12.4. Mantenha a sua pele longe da solução de paragem para é a 0,5M H2SO4 solução. 
12.5 Não usar os kits desatualizado. Não trocar os reagentes de lotes diferentes, para ela cairá a sensibilidade. 
12.6 manter os kits ELISA em 2-8ºC,não congelar. Retentor assentam as placas microwell evite a luz do sol direto para a amostra padrão e o incolor reagente cromogénicos são sensíveis à luz. 
12.7 Solução de substrato deve ser abandonada se transforma as cores.Os reagentes podem ser vire ruim se o valor de absorvência (450/630nm) do padrão de zero for inferior a 0,5 (A450nm<0,5). 
12.8 A coloração das necessidades de reacção 10-15 min após a adição de uma solução e solução B. e você pode prolongar o tempo de incubação para 20min se a cor for demasiado clara a determinar. Nunca exceda 25min, pelo contrário, encurtar o tempo de incubação adequadamente. 
12.9 A melhor temperatura de reação é de 25ºC. Maior ou menor temperatura provocará alterações de sensibilidade e os valores de absorvência. 
13. Para bagagem 
 Condições de armazenamento: 2-8ºC. 
Período de armazenamento: 12meses.