Tecido animal infarto isquêmico Ttc de solução de coloração

TTC (2, 3, 5-cloreto triphenyltetrazolium) é um teor de solúvel sensíveis à luz composto. A coloração TTC tem sido usada para determinar a extensão do infarto induzida por isquemia em tecidos. TTC substrato é de desidrogenase como receptor de prótons de piridina-enzima nucleotídeo da cadeia respiratória. Ela agir com desidrogenase de tecido para gerar compostos vermelho. A isquemia tecidos apresentam baixa atividade da desidrogenase que não podem reagir com TTC e unstained esquerda.  

Uso:

1.  Isole a amostra de tecido

Os animais foram anestesiados. Isolar os tecidos (por exemplo, cérebro, coração) rapidamente, coloque em -20ºC a quick anticongelante de 20-30 min o de amostras de tecido pode ser preservada a -80ºC durante um curto período de tempo se não é urgente.

2. Preparar a seção congelados

Deixe o tecido congelado descongelar a granel ligeiramente. A secção a granel de tecido em números de 2 a 3 mm de espessura com Leica corte manual.

3. A coloração TTC

Mergulhe os slides de TTC de pré-solução de coloração, incubar 15-30 min a 37ºC evitando luz. Agite suavemente o desliza a cada 5 a 8 min para tornar a solução de coloração contacto com lâminas de modo uniforme.

4. Fotografia e analisar o resultado

Parar a reacção de coloração pela adição de solução fixadora e preservar desliza na condição de escuro. Tire fotos para lâminas no dia seguinte.

A nódoa resultado:

Tecidos normais mostrar vermelho enquanto as áreas de infarto mostrar doente branco.

Armazenamento e transporte:  válido em 3 meses quando armazenados a 4 ºC e mantidos no escuro.

1. Utilize amostras frescas sem correção. As fatias devem ser fino e afiadas. O controle de desengate rápido tempo de congelamento adequadamente para facilitar o corte. Mantenha fatias plana.

2. As lâminas coradas são válidas em vários meses quando conservados em solução fixadora e evitar a luz. As lâminas podem desvanecer-se sob a luz solar.

3. A coloração TTC solução é válida em um mês quando mantidos em 4 ºC e condição de escuro. Assegurar a restauração em condições normais de temperatura ambiente antes de usar.