Descrizione del prodotto
Nome del prodotto
HiPure Plasmid DNA Mini Kit
Cat. N. e
specifiche
P100102,100 Prep/Kit
Introduzione
Il sistema HiPure Mini fornisce un metodo miniprep DNA plasmidico rapido, semplice ed economico per applicazioni di laboratorio di biologia molecolare di routine. I mini kit plasmidici HiPure utilizzano la tecnologia a membrana in silice per eliminare le fasi complesse associate a resine o impasti sciolti. Il DNA plasmidico purificato con Mini Kit è immediatamente pronto per l'uso. Non sono richieste estrazione di fenolo e precipitazione di etanolo, e DNA plasmidico di alta qualità viene eluito in un piccolo volume di tampone Tris o acqua.
Composizione principale
Codice prodotto
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P100102
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P100103
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Tempi di purificazione
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100 Prep
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250 Prep
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RNasi A.
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5 mg
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10 mg
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Buffer P1
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30 ml
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80 ml
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Buffer P2
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30 ml
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80 ml
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Buffer P3
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40 ml
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100 ml
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Buffer PW1
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60 ml
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140 ml
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Buffer PW2
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20 ml
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50 ml
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Tampone di eluizione
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15 ml
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30 ml
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Mini colonne HiPure DNA II
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100
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250
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Provette di raccolta da 2 ml
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100
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250
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Condizioni di conservazione e validità
I componenti del kit DNA plasmidico HiPure sono garantiti per almeno un anno se conservati a temperatura ambiente. Se si formano precipitati nei tamponi, riscaldare a 37ºC per dissolversi. Dopo l'aggiunta di RNasi A e del reagente LyseBlue opzionale, il tampone P1 rimane stabile per 6 mesi se conservato a 2-8°C.
Preparazione prima dell'uso
Diluire il tampone PW2 con etanolo al 100% e conservare a temperatura ambiente temperatura
Aggiungere il flaconcino di RNasi A al flacone di Buffer P1 e memorizzazione a 2-8˚C.
Tampone di eluizione a caldo a 70°C se il DNA plasmidico è >10 kb
Guida alla risoluzione dei problemi
A:basse rese di DNA
1.
il tampone
PW2
non contiene etanolo
:
Prima
dell'uso, aggiungere etanolo al tampone PW2.
2.scarsa lisi cellulare
:
Le cellule potrebbero non essere state adeguatamente disperse prima dell'aggiunta
del tampone P2. Agitare per risospendere completamente le cellule.
3.
perdita di capacità legante della matrice di colonna durante la conservazione:
Seguire il protocollo opzionale per l'equilibratura della colonna prima di trasferire il lisato eliminato nella colonna. Aggiungere 100µL
3M NaOH alla colonna prima di caricare il campione. Centrifugare a 13000
giri/min per 30 secondi. Eliminare il filtrato.
B:il DNA plasmidico galleggia fuori dal pozzetto durante il caricamento del gel di agarosio
1.l'etanolo non è stato completamente rimosso dalla colonna dopo le fasi di lavaggio, centrifugare la colonna come indicato per essiccare la colonna prima dell'eluizione.
C:contaminazione del DNA ad alto peso molecolare del prodotto
Non agitare o miscelare in modo aggressivo dopo aver aggiunto il tampone P2. Le colture in eccesso contengono cellule lisate e DNA degradato. Non far crescere la cellula per più di 16 ore.
D:l'assorbanza del DNA purificato non riflette accuratamente la quantità di Il plasmide (rapporto A260/A280 è alto o basso)
Il DNA plasmidico è contaminato con RNA
:
Il trattamento con RNasi A è insufficiente confermare che la soluzione di RNasi A è stata aggiunta al
tampone P1 prima del primo utilizzo. La soluzione di RNasi A può degradarsi a causa di temperature elevate (>65 °C) o di una conservazione prolungata (> 6 mesi a temperatura ambiente).
2.
la lettura di fondo è elevata a causa del particolato fine della silice
:
Centrifugare il campione di DNA alla velocità massima per 1 minuto; utilizzare il surnatante per ripetere le letture dell'assorbanza.
Imballaggio e spedizione
Certificato
Laboratorio
Officina
Area prodotti finiti