Master Mix multiplex a fase unica Dspathtm 4X altamente efficiente e stabile

Model No.
V5005 V5006
Capacità di Produzione
100 Bag/Bags Per Day
Prezzo di riferimento
$ 89.91 - 179.91
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Descrizione del Prodotto

        Master Mix multiplex a un passo DSPathTM 4X

Cat. N.: V5005, V5006
 

Componenti

 

Componente V5005  ( 200 rxn, 20 μl/rxn) V5006  ( 5000 rxn, 20 μl/rxn)
   Master Mix multiplex 4X DSPathTM  * 1  ml   × 1   25  ml   × 1  
* contiene trascrittasi inversa, inibitore della RNasi, UDG labile al calore e DNA polimerasi Taq con avvio a caldo , dNTP inclusi i componenti dUTP e tampone .

Conservazione
Questo reagente deve essere conservato a -20°C.

Descrizione
La    miscela master multiplex a fase unica DSPathTM 4X è utilizzata per eseguire applicazioni PCR in tempo reale multiplex a fase unica con qualsiasi primer gene-specifico e set di sonde, ed è adatta sia per RNA che per DNA bersaglio.  Questa miscela master è formulata con componenti tampone ottimizzati per consentire l'amplificazione multiplex di un massimo di quattro sequenze bersaglio di RNA o DNA in una singola reazione. La miscela master viene fornita a una concentrazione 4X che consente di immettere più campione in ciascuna reazione, aumentando la sensibilità anche in caso di reazioni a basso volume.
 

Protocollo

1. Preparazione     del sistema di reazione  

1.1   preparare il sistema di reazione facendo riferimento alla tabella seguente.   Scongelare tutti i reagenti su ghiaccio.   Quando si   preparano più pozzetti di reazione, è necessario riservare un margine del 10% per ciascun componente per evitare perdite di pipettaggio.

1.2 coprire la piastra di reazione con un film ottico. Mescolare bene   capovolgendo   e centrifugare.

Sistema a reazione rapida:

Componente

Volume

Concentrazione finale

   Master Mix multiplex 4X DSPathTM  

5  μl

1 X

Miscela primer-sonda

1  μl

Primer: 400-900 Nm

Sonda: 100-250 Nm

Campione *  

Regolare secondo necessità

1 pg-100 ng

Acqua per PCR

Regolare secondo necessità

-

Volume totale

20  μl

 

Sistema di reazione standard:

Componente

Volume

Concentrazione finale

   Master Mix multiplex 4X DSPathTM

12.5  μl

1 X

Miscela primer-sonda

2.5  μl

Primer: 400-900 Nm

Sonda: 100-250 Nm

Miscela primer-sonda

2.5  μl

Primer: 400-900 Nm

Sonda: 100-250 Nm

Campione *  

Regolare secondo necessità

1 pg-100 ng

Acqua per PCR

Regolare secondo necessità

-

Volume totale

50  μl

*   i campioni di DNA o RNA sono accettabili. La trascrizione inversa non influisce sui campioni di DNA .

 

  Preparare   RT- qPCR utilizzando la seguente condizione di ciclizzazione termica

Sistema a reazione rapida:  

Fase

Fase

N. ciclo

Temperatura

Ora

Trascrizione inversa

1

1

55 °C   *

10   min

Attivazione della polimerasi

2

1

95 °C

2   min

Amplificazione

3

45

95 °C

3  sec

60 °C

30  sec  

 

Sistema di reazione standard:  

Fase

Fase

N. ciclo

Temperatura

Ora

Trascrizione inversa

1

1

55 °C   *

10   min

Attivazione della polimerasi

2

1

95°C

2   min

Amplificazione

3

45

95°C

15  sec

60°C

60  sec  

* la temperatura può essere regolata tra 48 °C  e 55 °C.

 

3. Analizzare i risultati

L'analisi dei dati varia a seconda dello strumento utilizzato. Per ulteriori informazioni, consultare la guida dell'utente dello strumento.   In generale, l'analisi dei dati comprende principalmente:

  1. Osservare la curva di amplificazione e impostarla in base alle esigenze, ad esempio:

a.  impostare linee di base e linee di soglia appropriate

b.   rimuovere alcuni valori di outliers tipici dall'analisi

2. Osservare se vi è una differenza nel valore CT tra   i pozzetti multipli ;

3. Per la quantificazione assoluta   , osservare   la pendenza, l'efficienza di amplificazione, il  valore R2, l'intercetta, Valore CT e valori esterni della curva standard .

 

Highly Efficient and Stable Dspathtm 4X One-Step Multiplex Master Mix

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