Kit di sintesi cDNA a primo filamento Swescript Rt II con gDNA Attrezzo di smontaggio

Model No.
G3333-100
Habit Denominazione
Medicina chimica
Applicazione
Industria, Ricerca scientifica
Proprietà
Reattivo biochimica
Pacchetto di Trasporto
Carton
Specifiche
100RXNS
Marchio
Servicebio
Origine
China
Prezzo di riferimento
$ 99.00 - 112.50
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Descrizione del Prodotto

Introduzione al prodotto

Questo prodotto utilizza la trascrittasi inversa mutante modificata per sintetizzare cDNA del primo filamento mediante trascrizione inversa ad alta efficienza utilizzando RNA totale o mRNA come stampo. Il kit contiene tutti i reagenti necessari per sintetizzare cDNA di primo filamento di alta qualità e fornisce due cDNA. Sono disponibili primer sintetici: Primer esamer random e primer Oligo (DT)18. Il prodotto di cDNA a singolo filamento sintetizzato può essere utilizzato direttamente per successive reazioni PCR o qPCR. La trascrittasi inversa (SweScript RT II) è una trascrittasi inversa mutante basata sulla trascrittasi inversa M-MLV e ottenuta attraverso screening dell'evoluzione in vitro. SweScript RT II non ha attività di RNasi H ed evita lo stampo ibrido DNA/RNA nella reazione di sintesi di cDNA del primo filamento. L'RNA intermedio viene degradato per assicurare la quantità e la lunghezza della sintesi del cDNA del primo filamento. Rispetto all'enzima di tipo selvatico e alla prima generazione di SweScript RT i, la stabilità termica e l'efficienza di sintesi del cDNA della SweScript RT II di seconda generazione sono ulteriormente migliorate. Sintetizzare efficacemente cDNA nell'intervallo di -65ºC, e completare la reazione di trascrizione inversa nei 5 minuti più veloci, che è particolarmente adatta per la trascrizione inversa di RNA con struttura complessa.

Questo kit fornisce anche il reagente gDNA Remover, che può rimuovere rapidamente la contaminazione di DNA genomico residuo nello stampo di RNA prima della fase di trascrizione inversa, migliorare l'affidabilità dei risultati sperimentali e semplificare la progettazione di primer qPCR senza la necessità di progettare primer attraverso esoni.
Swescript Rt II First Strand Cdna Synthesis Kit with Gdna Remover

Conservazione e trasporto

Trasporto di sacchi di ghiaccio (ghiaccio umido);

Conservare a -20°C, valido per 12 mesi.

Componenti :
Numero componente Componente G3333-50 G3333-100
G3333-1 Miscela enzimatica SweScript RT II 50 μL 100 μL
G3333-2 5×tampone di reazione 200 μL 400 μL
G3333-3  Primer oligo (DT)18 (100 μm) 50 μL 100 μL
G3333-4 Primer esamer casuale (100 μm) 50 μL 100 μL
G3333-5 Rimozione gDNA 50 μL 100 μL
G3333-6 10×di tampone di rimozione del DNA 50 μL 100 μL
G3333-7 Acqua senza nucleasi 1 ml 1 ml
manuale 1 1
A: contiene inibitore della RNasi;
b:contiene la miscela di dNTP e Mg2 + .

Fasi
1. Rimozione del genoma
(1) mettere lo stampo di RNA e acqua priva di nucleasi su ghiaccio per fondere per l'uso;
(2) preparare un sistema di reazione per la rimozione del genoma (10 μL raccomandati) :
Componente Volume
10×di tampone di rimozione del DNA 1 μL
Rimozione gDNA 1 μL
RNA/mRNA totale 0.1 ng-5 μg/10 pg-0.5 μg

Acqua senza nucleasi
  		Aggiungere a 10 μL
(3) miscelare delicatamente e centrifugare;
(4) incubare a 37°C per 2 minuti e porre su ghiaccio per un uso successivo;
Sintesi di cDNA di primo filamento
(1) preparazione del sistema di reazione di trascrizione inversa (si raccomanda un sistema di reazione di 20 μL):
Componente Volume

Soluzione di reazione per rimozione genoma 		10 μL
5×di tampone di reazione 4 μL
 Primer oligo (DT)18 (100 μm) 1 μL
O primer esamer casuale (100 μm) O 1 μL
O primer gene-specifico (2 μm) O 1 μL
Miscela enzimatica SweScript RT II 1 μL
Acqua senza nucleasi Aggiungere a 20 μL
Nota: Per stampi con GC elevato o complessi, lo stampo di RNA, i primer di trascrizione inversa, acqua priva di nucleasi può essere premiscelata e incubata a 65°C per 5 minuti, e quindi rapidamente raffreddata su ghiaccio. Aggiungere quindi altri componenti di reazione.
(2) miscelare delicatamente e centrifugare;
(3) impostazione del programma di trascrizione inversa:
Temperatura Ora
25ºCa 5 min
55ºCb 5-15 min
85ºC 5 s
R: Se si sceglie di utilizzare il primer per esameri Random, incubare a 25°C per 5 minuti e poi eseguire reazioni successive; se si sceglie di utilizzare il primer Oligo (DT)18 o il primer gene-specifico, è possibile eseguire direttamente la reazione a 55°C;
b: Per modelli con GC elevato o complessi, la temperatura di trascrizione inversa può essere aumentata a 65°C.
Precauzioni
1. Durante il funzionamento, indossare guanti monouso per evitare la contaminazione da RNasi.
Il prodotto di trascrizione inversa può essere conservato a -20°C per un breve periodo di tempo. Se è necessario conservare a lungo termine, si consiglia di conservarlo a -80°C dopo l'aliquotazione per evitare il congelamento e lo scongelamento ripetuti.
Se lo stampo è di origine eucariotica, si raccomanda di scegliere il primer Oligo (DT)18 per accoppiarlo con la coda 3'Poly A di mRNA eucariotico per ottenere la massima resa di cDNA a lunghezza intera.
4. Per la trascrizione inversa dell'RNA procariotico, utilizzare il primer per esamero casuale o il primer gene-specifico.
L'innesco esamero casuale ha un'ampia applicabilità, adatta per stampi di mRNA, rRNA, tRNA, RNA piccolo e LncRNA.
Se la trascrizione inversa è seguita da un esperimento qPCR, l'innesco di Oligo (DT)18 e l'innesco di esamero casuale possono essere miscelati per rendere uguale l'efficienza di sintesi di cDNA di ciascuna regione dell'mRNA, il che contribuisce a migliorare l'autenticità e la ripetibilità dei risultati quantitativi.
Se i successivi inneschi di qPCR sono progettati attraverso esoni, la fase di rimozione del genoma può essere omessa.

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Agenti Chimici

TERAPIASINFRONTERAS.COM, 2023