Gdsbio IVD HS ADN polymérase Taq Hotstart avec tampon et tampon de chargement de la PCR

L'ADN polymérase Taq Hotstart HS

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Composants  

Le stockage

Ce réactif doit être maintenue à -30~15 °C.

Description

L'ADN   polymérase Taq Hotstart SH est un démarrage à chaud de  l'ADN polymérase Taq  produites par le mélange avec d'anticorps Taq ADN polymérase Taq en proportion optimale. En se fondant sur les propriétés thermostable de Taq anticorps, l'activité de    l'ADN polymérase Taq Hotstart SH demeure strictement fermé à 55 °C , en minimisant les amplification non spécifique au cours de la phases de chauffage et de mixage de la réaction   du système . Lorsque la réaction est maintenu au dessus de 30 sec à 95 °C , anticorps Taq est complètement inactivé et de la polymérase est complètement relâchée, assurant ainsi la très haute sensibilité et spécificité d'amplification de la PCR système. L'activation de    l'ADN polymérase Taq Hotstart SH  n'est pas affectée par le pH tampon, force ionique ou d'autres facteurs. Il est adapté pour divers   hot-start  et qPCR réactions PCR  basée sur Taq ADN polymérase . Il peut être utilisé pour amplifier les gènes en faibles copies à partir de modèles complexes (génome, ADNC) et est le préféré de   démarrage à chaud de     l'ADN polymérase Taq  pour réactifs de diagnostic moléculaire   fondée sur PCR/qPCR . Le produit de PCR a 3 '-d'un se termine et peut être clonée à T vecteur.

  Définition de l'unité

En utilisant le sperme de saumon de l'ADN activé en tant que modèle/apprêt, l'activité de l'ingestion de 10 nmol nucléotides total comme substances insolubles dans l'acide dans les 30 min à 74 °C  est défini comme 1 unité d'activité (U).

  Contrôle de qualité

Détection de fermeture d'activité : à 1   ×  Tampon Taq Champagne, la réaction a été menée à 65 °C  pendant 30 min, et de l'a publié l'activité était   <  5 %.

La détection de la libération  d'activité : en 1   ×  Tampon Taq Champagne, après un chauffage à 95 °C  pendant 30 sec, et de l'a publié l'activité était   >  95 %.

L'exonucléase :   50 U de détection de résidus de cette   polymérase  et 50 pmol   ssDNA   et d'ADN bicaténaire substrat ont été incubés à 37 °C  pendant 16 h, et les bandes d'ADN  n'a pas changé après la dénaturation de la page.

D'endonucléase de détection de résidus :   50 U de cette   polymérase  et 0,3   μg de pBR322 L'ADN ont été incubés à 37 °C  pendant 4 h, et les    bandes d'ADN des plasmides ne sont pas modifiées par  électrophorèse sur gel d'agarose.

La RNase:   50 U de détection de résidus de cette   polymérase  et 1   μg  de 293 L'ARN cellulaire ont été incubés à 37 °C  pendant 30 min, et les bandes de l'ARN  est demeuré inchangé par électrophorèse sur gel d'agarose.

L'E.coli de  détection de résidus de l'ADN : l'acide nucléique de résidus dans   50 U   de cette   polymérase  a été détecté par l'   E. coli  gDNA qPCR, TaqMan spécifiques et les résidus d'   E. coli  génome a été inférieure à 10 copies.

Détection : fonctionnelle   dans le    système PCR 20 μl, adnc correspondant à l'ARN total de 1 pg-200 ng les cellules HeLa a été utilisé comme modèle pour amplifier 4 différents loci de gènes.   Le gradient de produit de PCR rendement pourrait être détectée par fluorescence après 35 cycles.   Au minimum, les produits d'amplification correspondantes ont été obtenues à partir de l'adnc correspondant à l'ARN total de 1 pg les cellules HeLa.

Protocole

Système de réaction

A.   Pour la plupart des réactions PCR, la concentration finale optimale de Mg ²⁺  est de 1,5-2 mm.   Le Mg ²⁺  avec une concentration finale de 2 mM a été inclus dans le système. Si nécessaire, la concentration optimale de Mg ²⁺  peut être exploré avec 25 mM de MgCl ₂  à des intervalles de 0,2-0,5 mM.

B.   La réaction optimale de la concentration de différents modèles varie, et le tableau ci-dessous montre la quantité recommandée de 50  μl de  réaction des modèles de système.

C. Le montant de l'enzyme peut être réglée entre 0.125-0,5   μl . En général, en augmentant la quantité d'enzyme peut augmenter le rendement d'amplification, mais il peut diminuer la spécificité.

*   Lorsque le contenu en GC du fragment amplifié est   >   60 %, et d'amplification normale ne peut être réalisé après l'optimisation des conditions ,   PCR Enhancer ( DSBio  #P 9041 ) est recommandée pour optimiser la réaction PCR.

 Procédure de réaction

* La température de recuit doit être ajustée en fonction de la Tm de la valeur de l'apprêt, qui est généralement configurée pour être de 3 à 5 °C  inférieure à la valeur de Tm de l'apprêt.