Botellas de 10ml de células necróticas Ioduro de Propidio Mancha Pi

PI, o de ioduro de propidio, es un análogo de bromuro de etidio, la cual se puede enlazar fuertemente al ADN. Libera la fluorescencia roja después de que se inserta en el doble de filamentos de ADN a lograr la tinción de células de ADN o núcleos. PI no puede penetrar la membrana celular intacta, pero puede penetrar la membrana celular dañado de finales de células apoptóticas y células muertas. Aprovechando esta característica, PI es usualmente usado en combinación con sondas fluorescentes como calceína-AM o FDA para teñir y observar en vivo y células muertas. O utilice la citometría de flujo para detectar la apoptosis y el ciclo celular cuantitativamente. La máxima longitud de onda de excitación de la PI-ADN de doble filamento complejo es de 535 nm, y la máxima longitud de onda de emisión es de 615nm.

La tinción de PI solución de este producto está listo para usar, con un PI la concentración de 100 μg/mL, lo que puede utilizarse directamente para la nuclear la tinción de células o tejidos necróticos, y la suspensión celular puede ser manchada con esta solución colorante para el ciclo celular detección por parte de la citometría de flujo .

Uso:

Pasos para el funcionamiento de la citometría de flujo para detectar el ciclo celular:

1. El cultivo de células vivas son digeridos, lavado con PBS y percibidos por centrifugación a baja velocidad para obtener bolitas de celda.

2. Añadir lentamente el 1-3 mL de etanol al 90% pre-enfriado a -20°C a la celda de pellet, resuspender las células en un baño de hielo durante la noche.

3. Centrifugar a 1500 rpm durante 5 minutos para recoger las células, resuspender en PBS, y centrifugar de nuevo para eliminar el sobrenadante.

4. Añadir 250 μL de PBS para resuspender las células.

5. Añadir 2 μL de ARNASA UN WGR (recomendado) en una concentración8021 de 1 mg/mL, y baño de agua a 37°C durante 40 minutos.

6. Añadir 50 µl de solución de la tinción de PI y se incuba en la oscuridad durante 20 minutos (el tiempo puede ser ajustado de acuerdo a la coloración resultados de los materiales experimentales).

7. La citometría de flujo de la detección.

Pasos de funcionamiento del microscopio fluorescente la observación de la vida y las células muertas:

1. Después de que el cultivo de células adherentes, quite el medio y lavar dos veces con PBS.

2. Diluir la solución de la tinción de PI entre 10 y 20 veces con PBS para preparar una solución con tinción de PI una concentración final de 5-10 μg/mL. Añadir una cantidad adecuada de solución de trabajo de la tinción de PI para el bien para cubrir las celdas, y se incuba durante 5-10 minutos a temperatura ambiente en la oscuridad.

3. Desechar la tinción de trabajo, agregar el PBS para cubrir las celdas, y observar con un microscopio de fluorescencia. Los núcleos de células muertas o finales de células apoptóticas muestran fluorescencia roja.

1. Tintes fluorescentes tienen el problema de temple. Se recomienda para completar la prueba en el mismo día después de la tintura.

2. Por favor, use guantes desechables y bata de laboratorio durante la operación.